ELEKTROPORATORIAI
Elektroporavimas tai procesas, kurio
metu ląstelės yra paveikiamos trumpu stipraus elektrinio lauko impulsu [1]. Impulso
elektrinio lauko stipriui kintant nuo kelių šimtų iki kelių tūkstančių voltų
centimetrui, trukmė nuo dešimčių mikrosekundžių
iki dešimčių milisekundžių, ląstelių suspensija staiga tampa laidi, ląstelių
membranos tampa pralaidžios jonams ir įvairioms molekulėms, tarp jų ir
makromolekulėms, pvz., baltymams, DNR, kurios gali patekti į ląstelės vidų.
Atjungus elektrinio lauko poveikį, ląstelių laidumas ir pralaidumas atsistato į
ankstesnį, ląstelėse lieka įterpti objektai. Taip ląstelė lieka gyvybinga ir
turinti naujas savybes. Viršijus tam tikrą elektrinio lauko poveikio galią,
ląstelės žūva [2].
Elektroporatorius tai elektros
įrenginys, kuris suformuoja stačiakampio formos elektrinius impulsus, kurių parametrus
galima keisti tam tikrose minėtose impulso ribose.
Elektroporacijos metodas
Elektroporacijos metodo pradininku pripažįstamas
Bilefeldo universiteto profesorius Eberhart Neuman. Jis su bendraautoriais 1982 m . paskelbė teorinį ir
eksperimentinį darbą „Gene transfer into
mouse lyoma cells by electroporation in high electric fields.“ [1] (Genų
perkėlimas elektroporacija į pelės Lyomo ląsteles stipriuose elektriniuose laukuose),
kuriame, elektrinio lauko teorijos pagrindu, pateikė eksperimentiškai
patvirtintus rezultatus. Parodė, kad DNR elementas gali būti įterptas į ląstelę
– vezikulę elektrinio lauko impulsu, kurio didžiausias elektrinių potencialų
skirtumas:
, (1)
kur:
E0 – elektrinio lauko
stiprio impulso amplitudė,
r – vezikulės sferos spindulys.
Eksperimento sąlygomis praėjus 10 min nuo poveikio nurodyta
elektrinio lauko stiprio impulso amplitudė E0
= 8 (±5) kV/cm, stačiakampio
impulse trukmė τ ~ 5 μs, terpės temperatūra T
= 20ºC, ląstelių tankis apie 5x107 vnt/ml, DNR koncentracija – 50
μgDNR/ml. Parodyta, kad poveikis priklauso nuo elektrinio lauko stiprio
vektoriaus krypties kampo θ ląstelės
branduolio padėties vezikulės sferos atžvilgiu (1 pav.). 
(1) išraiškoje kampas
nulinis. Jei 
, tuomet:
(1) išraiškoje kampas
nulinis. Jei , tuomet:
(2)
1 pav. Elektrinio lauko stiprio vektoriaus
krypties kampas θ ląstelės branduolio
padėties vezikulės sferos centro atžvilgiu ir DNR ląstelės įterpimo eiga [1].
a) Kampo θ padėties
sąlyga;
b) , c) DNR DNR ląstelės įterpimo eiga;
d) Nepaveiktos ląstelės membranos domenai (ovalai);
e) elektrinio lauko impulsu pertraukta membrana,
įsimagnetinusiais domenais (ovalai su ±).
E.Neuman darbe [1] pateikta eksperimento schema (2
pav.) priimta pagrindu tiek kitų autorių tyrimuose [3, 4], tiek konstruojant
elektroporatorius [8].
2 pav. E.Neuman darbe [1] eksperimento schema. MC – elektroporavimo
kamera, kurios eskizaas nurodytas rodykle; SG – kibirkšties elementas; C –
kondensatorius; Cb – iškrovos kabelio induktyvumas; G – generatorius.
Kameroje MC (2 pav.) talpinama 0,35 ml eksperimentinės
terpės, generatoriaus G relaksacinis impulsas SG, C, Cb ir kontaktais
formuojamas į stačiakampį impulsą. Kituose darbuose ši pagrindinė schema
išlieka tiek vienuolių [4], tiek dvipolių [8] impulsų formavimui.
Tolesni E.Neuman teoriniai ir eksperimentiniai tyrimai
pateikti 1989 m .
jo redaguotame darbe [2] labiausiai cituojami tiek elektroporavimo
metodų taikymo tyrimuose, tiek įrangos užtikrinančios tų metodų realizavimą
kūrėjų darbuose. Ištirta impulsų dažnio w įtaka, pateikiama
išraiška (3) taikoma kituose [5, 9], vėlesniuose darbuose, kai reikia parinkti
elektrinio impulso parametrus:
, (3)
Praktinis elektroporacijos metodo ir įrenginių taikymas plito augant mokslinių tyrimų ir
publikacijų kiekiui nuo kelių dešimčių 2002 m iki 6500 publikacijų 2013 m . [4].
Elektroporatorių taikymo sritys
Šiuo metu elektroporavimas naudojamas
nepraeinančių medžiagų, tokių kaip vaistai, baltymai, fermentai, antikūnai,
nukleotidai, RNR ir net mažos organelės, įvedimui arba išvedimui pro gyvų
ląstelių membraną.
Elektroporavimas taikomas svetimos DNR įvedimui į bet
kokios prigimties ląsteles. Įvairios rūšys žinduolių, vabzdžių, vienaląsčių ir
augalų ląstelių, intaktinių bakterijų ir mielių buvo sėkmingai transformuotos
šiuos metodu.
Medicinoje
-
Vaistų pernešimo padidinimas į vėžines ir
patogenines ląsteles ar organizmus
-
Vietinio signalo indukcija
-
Ląstelių judėjimo indukcija
Biotechnologijoje
-
Mikroorganizmų nukenksminimas
-
Baltymų iš ląstelių ekstrakcijos padidinimas
-
Mikroorganizmų transformacija
-
Žinduolinių ląstelių transfekcija
-
Baltymų transfekcija.
Elektroporatoriai (įtaisai)
Elektroporatorius
EP-M [6]
Genų transfekcijos eksperimentuose buvo naudojamas impulsinis
elektroporatorius (3 pav.) generuojantis platesnio diapazono trukmes, didelės
galios impulsus bei įvairias šių impulsų serijos kombinacijas.
Elektroporatorius buvo sukonstruotas Kauno Technologijos universitete.
Elektroporatorius valdomas vidine klaviatūra, kuria galima nustatyti žemiau
išvardintus parametrus:
1. HV amplitudė;
2. HV impulso
trukmė;
3. pauzė tarp HV
impulsų;
4. HV impulsų
skaičius;
3 pav.
Elektroporatoriaus struktūrinė-blokinė schema.
5. pauzė tarp HV
ir LV impulsų sekų;
6. LV amplitudė;
7. LV impulso
trukmė;
8. pauzė tarp LV
impulsų;
9. LV impulsų
skaičius.
Čia: HV- aukšta
įtampa; LV – žema įtampa.
Elektroporatoriaus
EP-M pagrindiniai techniniai duomenys.
Matavimai vykdomi ir paklaidos matuojamos elektroporatoriumi apkraunant
75 Ω varža.
Ląstelių suspensijos elektroporacijai naudoti fiksuoti plokšteliniai
elektrodai, sukonstruoti VDU Biologijos katedroje (4 pav.). Tai 20 mm ilgio ir 8 mm pločio nerūdijančio
plieno plokštelės, tarp kurių dedama 2 mm storio plastmasinė plokštelė (tarp
elektrodų sudaromas 2 mm
tarpas); dvi tokios pat plokštelės tvirtinamos elektrodų šonuose, elektrodų
konstrukcija sujungiama plastikiniais varžtais, tokiu būdu elektrodai
izoliuojami vienas nuo kito. Tarp šių lygiagrečių elektrodų įdedamas 50 μl
lašas ląstelių suspensijos taip, kad būtų pakankamas kontaktas tarp suspensijos
ir elektrodų.
4 pav. Fiksuoti plokšteliniai elektrodai
Elektroporatorius
(VDU) [7]
VDU Biologijos katedroje, Biofizikos laboratorijoje sukonstruotas ir
pagamintas elektroporatorius (5 pav.) suformuoja
stačiakampio formos impulsus, kurių parametrus galima keisti tam tikrose
ribose: nuo100 μs iki 10 ms; iki 1.2 kV, impulsų skaičių 1÷1000 ir impulsų
pasikartojimo dažnį 0,1 ÷ 1,2 Hz.
Elektroporatoriaus blokinė schema (6 pav.) susideda iš 6 pagrindinių
blokų, kurio schema pavaizduota 10 paveiksle: maitinimo bloko (1), kuriame
suformuojamos visoms grandinėms reikalingos maitinimo įtampos; aukštos įtampos
bloko (2), kurį sudaro aukštos įtampos transformatorius su lygintuvu, išlyginta
aukšta įtampa laikosi 49 μF talpos kondensatoriuje; komparatoriaus, kuris
lygina užduotą impulso amplitudę su aukštos įtampos bloko išėjime esančia
įtampa - jei pastaroji pamažėja, tai komparatorius įjungia aukštos įtampos
transformatorių ir palaiko užduotą įtampą; impulsų formavimo bloko (4, 5, 6
blokai)- suformuoja stačiakampius impulsus, kurių parametrai užduodami pagal
impulso trukmę , pasikartojimo dažnį ir skaičių; tranzistoriaus rakto (7)-
perduoda kondensatoriuje CA sukauptą aukštą įtampą į darbinį bloką; darbinio
bloko – elektrodai ir elektroporuojamas objektas, tai yra ląstelių suspensija
(9 blokas). Aukštos amplitudės impulsai per varžų daliklį (Rd1, Rd2), tai pat
patenka į atminties oscilografą (C8-13, Rusija), kur gali būti stebimos jų
charakteristikos (8 blokas).
5 pav. Elektroporatorius (VDU)
6 pav. Elektroporatoriaus (VDU
Biologijos katedros biofizikos laboratorija) blokinė schema: 1 - maitinimo
blokas, 2 - aukštos įtampos generatorius, 3 - komparatorius (impulsų amplitudės
valdymo blokas) 4, 5 ir 6 blokai atitinkamai impulsų skaičiaus, trukmės bei
impulsų pasikartojimo dažnio generatoriai, 7 - tranzistorinis raktas,
perduodantis aukštos įtampos impulsus į darbinį bloką 9, kuriame vykdomas
elektropoavimo procesas, jame elektrodai, ląstelių suspensija, sudaranti uždarą
elektrinę grandinę varža Rp. Impulsų charakteristikos stebimos atsimenančiu
oscilografu 8.
Pramoniniai elektroporatoriai
Elektroninių
gaminių firmos siūlo specializuotus elektroporatorius skirtus įvairioms
minėtoms taikymo sritims.
4D-Nucleofector
elektroporatorius [6]
Pažangi technologija, skirta atlikti transfekciją
įvairiam ląstelių skaičiui
-
Greita – pralaidumas nuo 1 iki 16 šulinėlių per
10 sekundžių
-
Aukščiausi transfekcijos rezultatai
-
Adhezinių ląstelių transfekcija (Y-unit)
-
Pritaikyta darbui su daugiau nei 650 ląstelių tipų
Pastaba: transfekcija – tai virusų ir fagų genetinės medžiagos be
baltyminio apvalkalo įvedimas į ląstelę.
Gemini HT System dvivietė bangų elektroporacijos sistema generuoja
stačiakampes ir eksponentinio dėsnio bangas. Tai labai
tiksli sistema skirta efektyviai transfekcijai, tiekti bet kokį bangos mobilųjį
tipą bet kokiu formatu. Ji apima HT 200 Plate Handler 96 bei elektroporacijos plokštę
ir saugias Dome elektroporacijos kiuvetes.
Savybės ir privalumai
-
Universali
elektroporacija - visų tipų ląstelių transfekcijai;
-
Specialios programos -
Transfects ląstelės in vitro, in vivo, in ovo ir lipnių formų;
-
96 Na - Transform
prokariotinės ląstelės ir eukariotų ląstelėse bei 96 formatu;
-
Iš anksto nustatyti
protokolai - apima dažniausiai eukariotinio ir prokariotinio tipų ląsteles;
-
Vartotojo apibrėžti
protokolai - neribota galimybė pridėti ir keisti protokolus;
-
Sauga - rodo varžos
matavimo rezultatus kiekvieno impulso metu su trijų sluoksnių lanko apsauga;
-
Duomenų valdymas -
kiekvieno pristatyto QC ir trikčių impulsų valdymas;
-
Nuotolinis valdymas - gali
būti valdomas nuotoliniu būdu, kojiniu jungikliu arba PC;
-
Pasikartojimas - jungia
pažangias funkcijas, siekiant užtikrinti rezultatų atkūrimą;
-
Naudojimo
paprastumas - Touch Screen valdymas.
Gamintojo pateikiamos BTX sistemos ir atskirai generatoriai
Gemini X2 ir Gemini SC.
ECM 830 Square Wave
Electroporation System
SAVYBĖS
Platus įtampų 5-3000 V
Tiksli įtampos diskriminacija
Impulsų trukmė nuo 10 μs iki 10 s
Skaitmeninis ekranas faktinės įtampos ir impulso trukmei
pateikti
Panaudojimas:
-
Žinduolių
ląstelių transfekcija
-
In vitro ir in
vivo bandymai, ex vivo & in ovo audinių transfekcija
-
Branduolių įterpimas
-
Augalų protoplastų
transfekcija
-
Didelis našumas -
25/96
ECM 830 yra stačiakampės bangos
signalo impulsų generatorius, skirtas in vitro ir in vivo darbui. Universalus
ir tinka genų, narkotikų ir baltymų įterpimui, žinduolių ląstelių, audinių bei
embrionų branduolių perkėlimui, manipuliavimui embrionais, augalų protoplastų
ir pagrindinių bakterijų ir mielių transformacijoms. ECM 830 gali būti
naudojamas kartu su daugeliu BTX elektrodų ir kitais priedais.
Didelio našumo (HT) 96-25
sistema siūlo įvairių elektroporacijos technologijos pranašumų. Tai leidžia greitai
elektroporuoti daug mėginių, naudojant didelio našumo plokštės valdymo
technologiją.
Enhancer 3000 leidžia tyrėjui
stebėti naudojamų elektroporacijos programų pagrindinius elektrinius
parametrus. Elektros impulsų duomenys pateikiami grafiniame ekrane bangų formos
ir elektros parametrų vertėmis po kiekvieno elektroporacijos eksperimento. Šie
duomenys gali būti saugomi atminties kortelėje arba atsisiųsti į kompiuterį
analizės ir dokumentavimo tikslais.
ECM 830 ir ECM 630 Combo sistema
teikia papildomas galimybes ir lankstumą. ECM 630 - eksponente gęstančių bangų
generatoriaus teikia aukščiausią transformacijos efektyvumą įvairioms bakterijoms
ir mieliėms.
Patentuoti elektropoacijos
būdai ir įtaisai.
Dažniausiai patentuojami
elektroporacijos vykdymo būdai, tarptautinė patentų klasė (TIK) C12N 15/00 ir
C12N13/00. Generuojamų elektroporacijos impulsų charakteristikų parinkimui
apžvelgti patentuojami būdai. Juos analizuojant galima sužinoti optimalių ir
patentais apsaugotų impulsų parametrus. Būdų išradimų aprašymuose randama
informacija ir apie jų realizavimo įrenginius. Įtaisai patentuojami rečiau, taip
ir rasti užpatentuotus elektroporatorių, kaip įtaisų išradimus, galima
dažniausiai patentuojamus kartu su būdu, kaip [10]. Tai sąlygota tuo, kad
elektroporavimo įtaiso pagrindas, tai impulsų generatorius, o generatoriai
patentuojami klasifikuojant pagal signalų charakteristikas. Kita svarbiausia
elektroporatoriaus dalis – kontaktai taip pat patentuojami kartu su būdais.
Patentuoti elektropoacijos būdai
Patentuotas „Method of electroporation using bipolar oscillating electric fields“ būdas [9] skirtas sąlyginai sunkiau pasiduodančių
elektroporacijai vibraciniu bipoliu elektriniu lauku biologinių dalelių elektrochemoterapijai.
Šis metodas padidina ląstelių išlikimą ir transfekcijos efektyvumą, palengvina
ląstelių sintezę, sukeliant simetrišką poraciją tarp dviejų pusrutulių
ląstelių, kurios sąveikoja terpėje tarp elektrodų, sudarančių elektros lauką. Reikalavimai
numatomi procesui, kad sukelti biologinių dalelių poraciją, tai biologinių
dalelių pozicionavimas tarp elektrodų komplekto bipoliu vibraciniu pakankamo
stiprio elektros lauku sukeliant minėtų dalelių aibės poraciją, kai bipolis
vibracinis elektrinis laukas yra kvadratinių ar kitos formos dvipolių periodinių
impulsų formos, o impulsų dažnio apie: (10 ÷ 1000); (10 ÷ 250); (10 ÷ 100) kHz ir
60 kHz. Kitokie numatomi impulsų formos variantai:
-
minėta kvadratinė
bipolio signalo forma papildoma iki 5kV amplitudės piku.
-
bipolinis švytuojamasis
elektrinis laukas apie 0,8 ÷ 12,5 kV / cm.
-
bipolinis švytuojamasis
elektrinis laukas apie 2,2 kV / cm.
-
kvadratinė bipolė
bangos forma yra apie 50 ns ÷ 10 ms, taip pat apie 400 μs
Taip pat naudojami įvairios dvipolės formos impulsai:
-
10 ÷ 100 kHz dažniu ir
apmlitudė apie 1.2 ÷ 3,0 kV/cm, o impulso plotis apie 200 ÷ 400 μs.
-
60 kHz, apmlitudė apie 1,2 ÷ 3,0 kV / cm, impulso plotis apie 400 μsec.
Aprašomas įvairių terpių ir elektrodų formų taikymas.
Būdas „High-frequency electroporation for cancer therapy“ [10] skirtas vėžinių ląstelių elektroporacinei terapijai
aukštojo dažnio impulsais. Impulsų diagramose (7a pav.) matoma stačiakampio
impulso trukmė, paketo trukmė ir pauzė tarp impulsų paketų. (7b pav.) pateiktos A-C diagramos apibūdina veikiančių
impulsų elektrinio lauko stiprio E vertę
ir poveikį į ląstelę charakterizuojantį
parametrą – transmembraninį potencialą Fpm .
a)
b)
7 pav. Elektroporacijos proceso
veikiančių elektrinio lauko impulsų E(t)
ir jų poveikį ląstelei
charakterizuojančio transmembraninio potencialo Fpm(t) charakteristikos
Išradimo [10] aprašyme pateikiami ir jo realizavimo
įrangos duomenys bei schemos, išsamiai aprašomi atlikti eksperimentai. Bendra
elektroporacijos sistemos impulsų formavimo schema (8 pav.) apima personalinį
kompiuterį (paveiksle atvaizdas), valdymo šinomis sujungtą su mikrovaldikliu (Microcontroller), pasirenkamų formų
impulsų generatoriumi (Arbitrary Function
Generator) [11]
ir aukštos įtampos šaltiniu (High
Voltaage Power Supply), kuris nuosekliai sujungtas su srovės ribojimo
rezistorių bloku (Current Limiting
Rezistors), kondensatorių baterija (Capacitor
Bank) ir dviem lauko tranzistorių raktais, kurių vienas – teigiamo
poliaringumo ( (+) Polarity MOSFET Switch)
sujungtas valdymo šina su pasirenkamų formų impulsų generatoriaus išėjimu
tiesiogiai, kitas - neigiamo poliaringumo ( (-)
Polarity MOSFET Switch) sujungtas valdymo šina su pasirenkamų formų impulsų
generatoriaus išėjimu per inverterį (Inverer).
Valdymo raktų išėjimai sujungti su pirmu elektroporavimo elektrodu, antras
elektroporavimo elektrodas sujungtas su bendru įrenginio korpusu, turinčiu
nulinį potencialą.
8 pav. Ląstelinių audinių
elektroporacijos aukšto dažnio dvipoliais impulsais sistema [10]
Sistema veikia sekančiai:
Operatoriaus parinkta ir aktyvuota kompiuterio programa perduodama pirma valdymo
šina mikrovaldikliui, kuris nustato generatoriaus formuojamų impulsų seką ir jų
formą, antra valdymo šina aktyvuojamas
impulsų generatorius, trečia įjungiamas aukštos įtampos šaltinis. Pastarojo
įtampa nuoseklioje grandinėje per srovės ribojimo rezistorius, kondensatorių
bateriją, generatoriaus išėjimo signalais pakaitomis įjugiamus teigiamo ir
neigiamo poliaringumo raktus sudaro elektrinį lauką elekroporavimo elektrodų
apimtoje ląstelių medžiagoje. Kompiuterinė programa užtikrina visų valdomų
parametrų registravimą, išsaugojimą ir analizę.
Patentuoti elektroporatoriai
(įtaisai)
Kaip jau minėta, atskirai
elektroporatoriai, kaip įtaisai patentuojami išskirtinai retai. Iš peržiūrėtų įtaisų
patentų (TPK A61B18/12) labiausiai ištobulintas ir elektroporacijai
tinkamas dvipolių impulsų generatorius [12], kurio išradimo bendraautorius
Jerry R. Malis - vienas žymiausių elektroporatorių tyrėjų ir konstruktorių. Jo vardu
netgi vadinamas elektroporatoriaus impulso galią atitinkantis matavimo vienetas
– malis ,
išreiškiantis elektroporavimo efetyvumą ir suvokiamas vartotojams - specialistams
biotechnologams: 1 malis
Naujas ir laike ir veikimo principu išradimas [13], kuriame realizuojamas
magnetinės elektroporacijos būdas. Čia reikalaujamas elektrinis laukas, skirtas
elektroporacijai yra generuojamas naudojant pulsuojantį magnetinį lauką uždarame
magnetiniame junge, tokiame kaip toroidas, patalpintas apdorojamos skysčio terpės
tekėjimo takelyje. Skysčio terpė teka per magnetinio jungo angą ir išorę. Sistemos
privalumas, kad reikalaujama galia sukurti maksimalų srautą per magnetinį jungą
yra mažesnė, nei reikalaujama galios įprastiniu aparatų, skirtų atlikti
elektroporaciją.
9 pav. Magnetinės elektroporacijos įtaiso schema [13].
Įrenginys veikia sukuriant toroidinėje ritėje 10 (žymėjimai pagal [13]) magnetinį lauką, kai vamzdžiu 32
prateka (srauto kryptis pažymėta rodykle) veikiamų ląstelių terpė, impulso
srovė ritėje 1500 A ,
dažnis 4,4 MHz, terpėje veikiančio elektrinio lauko impulsas 5 kV/cm amplitude.
Generatoriai (ne patentuotieji) – nežinau ar tikslinga daugiau juos
papildomai aptarti (daugiau negu buvo aukščiau). Tokiam aptarimui šaltinių
surinkta pakankamai.
Generatorių
sprendimai, pramonės gaminami ir reikalavimai jiems aptarti aukščiau.
Papildomai
galima paminėti generatoriaus sprendimą [5], kurio elektrinė schema pateikta
vienopliam signalui (10 pav.), gali būti modifikuota dvipoliam, taikant [10]
pateiktą principą – invertuoti vienuolį impulsą antru kanalu.
10 pav. Vienpolių impulsų generatorius [5]
MC -mikrovaldiklis;
OC - optinė jungtis; RG - apribojimo rezistorius; T1 tranzistorius; RS – šunto
rezistorius, D - diodai; Rel1 - relė; C kondensatoriai. Gerai, kad yra elementų
parametrai, tad galima pasitikrinti skaičiuojant savo sprendimus.
Elektrodai
Elektroporavimo
elektrodai turi užtikrinti elektrinio lauko stiprį terpėje E V/cm. Tam jie turi būti atitinkamo ploto terpėje pagal srovės
tankį ir terpės laidumą. Elektrodų forma priklauso nuo taikymo srities. Tai
stačiakampės plokštelės [6, 7], adatos [14], kitokios formos [15]. Viena
paprasčiausių matoma 4 pav., tai viena nuo kitos izoliuotos plokštelės,
fiksuotu atstumu. Elektrodų skaičiuotei tinkami panaudoti šaltiniai [1, 3,
15,16] ir kiti, priklausomai nuo pasirinktos naudojimo srities.
IŠVADOS
Remiantis pateikta literatūros analize, tolesniam temos vystymui reiktų
užsiduoti bipolių impulsų parametrus, parinkti impulsų generatoriaus rūšį.
Tikslinga konkretizuoti projektuojamo
elektroporatoriaus taikymo sritį, numatyti ir užsiduoti impulsų valdymo reikalavimus.
Galima teigti,
kad elektroporatoriaus tyrimo ir projektavimo darbe turėtų būti:
- Apibrėžta elektroporatoriaus naudojimo sritis, terpės ir intarpų medžiagos, žinoma jų biocheminė charakteristika, tam, kad surasti fizikinius parametrus.
- Pagal analogus ir skaičiuojant parenkami reikalingi elektrinių impulsų parametrai.
- Skaičiuojami elektrodų parametrai, parenkama jų konstrukcija.
- Parenkamas dvipolis generatorius.
- Parenkama elektrinių sujungimų schema, konstrukciniai elementai.
- Parengiama naudojimo tvarka (instrukcija).
LITERATŪRA
1. Gene transfer into mouse lyoma cells by electroporation in
high electric fields.E. Neumann, M. Schaefer-Ridder, Y. Wang…
- The EMBO …, 1982 - ncbi.nlm.nih.gov. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: < http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC553119/>
2. Electroporation and Electrofusion in Cell
Biology. / Edited by
Eberhard Neumann, A.E. Sowers, C.A. Jordan. Plenum press, New York, 1989.
Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: <https://books.google.lt/books?id=Y6IpZ44vo_0C&pg=PA61&lpg=PA61&dq=Eberhard+Neumann+bielefeld+elektroporation&source=bl&ots=SJF6Pbch_1&sig=FZC0YuCuq3-SVNv1PO49rtHt3BQ&hl=lt&sa=X&ei=S-fMVKHJMoKzUbWrg8AK&ved=0CE0Q6AEwBA#v=onepage&q=Eberhard%20Neumann%20bielefeld%20elektroporation&f=false>
3. Kinosita, K., Jr., and T. Y. Tsong. Voltage-induced
changes in the conductivity of erythrocyte membranes. Biophys J. 1978 Oct; 24(1): 373–375. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: < http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1473925/pdf/biophysj00742-0375.pdf>
4. Tranfection. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per
internetą: <http://www.lonza.com/products-services/bio-research/transfection.aspx>
5. Combined Pulse
Electroporation – A Novel Strategy for Highly Efficient Transfection of Human
and Mouse Cells. Thorsten Stroh, Ulrike Erben, Anja A. Kühl, Martin
Zeitz, Britta Siegmund. Published:
March 2, 2010. DOI: 10.1371/journal.pone.0009488. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0009488>
6. Kačkauskaitė, D. Ląstelių
elektroporacija ir DNR elektropernaša į ląsteles in vitro. VDU, Kaunas, 2008. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per
internetą: < http://vddb.laba.lt/fedora/get/LT-eLABa-0001:E.02~2008~D_20080627_112301-73489/DS.005.0.01.ETD>
7. Sadauskienė, S. ląstelių
elektropermeabilizacijos nustatymas
naudojant bleomiciną. VDU, Kaunas, 2008.
Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga
per internetą: <http://vddb.library.lt/fedora/get/LT-eLABa-0001:E.02~2008~D_20080627_112754-48863/DS.005.0.02.ETD>
8. 4D-Nucleofector
elektroporatorius. Žiūrėta
2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://www.interlux.lt/apie-kompanija/transfekcija/4d-nucleofector-elektroporatorius-bei-reagentai-lasteliu-transfekcijai_895>
9. Method of electroporation
using bipolar oscillating electric fields. WO
1992006185 A1. Žiūrėta
2015.01.04. Prieiga per internetą: < http://www.google.com.tr/patents/WO1992006185A1?cl=en>
10. High-frequency
electroporation for cancer therapy. US 20120109122 A1. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per
internetą: < http://www.google.com/patents/US20120109122>
11. Arbitrary/Function Generators AFG
3011/3021B/3022B/3101/3102/3251/3252 Data Sheet. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga
per internetą: <https://productrealization.stanford.edu/content/05-resources/02-processes/03-electronics/tektronix-afg3021b.pdf>
12. Bipolar RF generator. US5318563 A. 1994.06. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://www.google.co.in/patents/US5318563>
13. Apparatus
for performing magnetic electroporation, US
8673623 B2. Žiūrėta
2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://www.google.com/patents/US8673623>
14. Apparatus and method for reducing subcutaneous
fat deposits by electroporation. US RE43009 E1. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per
internetą: <http://www.lens.org/lens/patent/US_8298222_B2/fulltext >
15. Electroporation
to deliver chemotherapeutics and enhance tumor regression. US 8298222 B2. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://patentimages.storage.googleapis.com/pdfs/US8298222.pdf>
Smith KC. A Unified Model of
Electroporation and Molecular Transport. Massachusetts Institute of Technology;
Cambridge, Massachusetts: 2011. Žiūrėta 2015.01.04. Prieiga per internetą: <http://dspace.mit.edu/bitstream/handle/1721.1/63085/725958797.pdf>
16. E.K.Kozlova, A.M. Chernysh, А.Р.
Chernyaev, V.V. Moroz, M.S. Bogushevich, P. Yu. Alekseeva. Membrane
electroporation under the combined action of physicochemical factors on
erythrocytes // European Association for Red Cell Research,15th Meeting,
Murten, Switzerland, April, 2005. P. 78.
Komentarų nėra:
Rašyti komentarą